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甲基化检测样本莂n硎约梁
DNA甲基化转化与离心柱式纯化试剂盒
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CWY122M
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DNA经亚硫酸氢盐处置赏罚后，可使未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶稳固，进而实现甲基化碱基的识别。本试剂盒将DNA变性和亚硫酸氢盐转化历程整合为一步，极大缩短了转化时间而不影响转化效率，转化效率可到达99.5%以上。
本试剂盒通过团结纯化柱，从亚硫酸氢盐修饰的溶液中接纳DNA，接纳的DNA纯度高，完整性好，可直接用于测序、甲基化PCR等下游实验。
? 转化速率快：转化反映仅需70 min。
? 转化接纳效率高：未甲基化的胞嘧啶转化效率≥ 99.5%，接纳率＞80%。
? 投入量规模广：支持100 pg~2 μg规模DNA投入量。
? 样本兼容规模广：支持粪便、血液、组织、体液等提取纯化后的DNA、cfDNA为起shi样本。
1. 转化效率高
【实验1】以293细胞gDNA掺入1% Unmethylated Lambda DNA为模板，投入量划分为2 ng、10 ng、100 ng和500 ng，划分使用新利体育世纪CWY122以及行业标杆A公司的试剂盒举行亚硫酸氢盐处置赏罚糰n炕，获得的核酸使用λ DNA甲基化特异性引物举行扩zeng，扩zeng产物依ci举行AGE判断、胶接纳、NGS建库及剖析。
图1：甲基化转化试剂盒的转化效率秠uan刃Ч
实验效果批注：新利体育世纪的甲基化检测样本莂n硎约梁邪奏ぷ蜞奏さ男试99.5%以上。
2. 接纳率高
【实验2】以人甲基化DNA尺度品为模板，划分使用新利体育世纪CWY122和行业标杆A公司的试剂盒举行亚硫酸氢盐处置赏罚糰n炕，获得的核酸使用Nanodrop定量剖析。
图2：甲基化转化试剂盒的接纳率秠uan刃Ч
实验效果批注：新利体育世纪的甲基化检测样本莂n硎约梁械慕幽陕首芴逶80%以上，显着优于A公司。同时接纳率会因样本类型、样本DNA片断巨细、样本投入量以及样本质量而有所差异。
| 生涯条件 | 运输条件 |
|---|---|
| 吸附柱DF 2-8℃生涯，其余组分15-30℃生涯 | 吸附柱冰袋运输，其余组分室温运输 |
水、TE 或改良的 TE 缓冲液可用于消融 DNA，而且不会滋扰转化历程。
甲基化转化历程中，转化时间过久会引起甲基化的C部门酿成U，导致假阴性，请严酷an照操作说明书举行操作。
对基因组DNA举行亚硫酸氢盐处置赏罚后，由于非甲基化的胞嘧啶残基转化为尿嘧啶，以是原shi碱基配对不再存在，接纳的DNA通常富含A、U和T，而且在室温下为单链，具有有限的非特异性碱基配对。260 nm处的吸收系数与RNA的吸收系数相似。当纯化后的基因组DNA OD260为1时，相当于约40 μg/mL的核酸浓度。
基于处置赏罚后核酸状态的特殊性，其OD230会泛起异常征象，可能导致OD260/OD230比值不稳固，实验批注这种情形不影响后续的PCR反映。OD260/OD280比值应为1.7-1.9。若是洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，由于pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不体现纯度低。
（1）对转化产物的定量方式选择错误：转化产物以单链形式存在，应使用ssDNA定量方式。
（2）Input DNA有杂质：确保DNA的A260/A280比值在1.8 - 2.0之间；
（3）漂洗缓冲液乙醇含量不足：请加入试剂瓶标签上指定体积的无水乙醇，勿长时间开盖放置；
（4）缓冲液DB中有机溶剂含量不足：请勿长时间开盖放置；
（1）转化液失效：转化液对光敏感，应避光生涯，阻止袒露在光线下；
（2）反映温度或时间设置错误：请an照说明书准确设置反映温度与时间；
（3）Input DNA样本GC投入量过高：应凭证样本特殊性适当镌汰投入量。
亚硫酸氢盐修饰后的DNA建议连忙检测，否则请于-20℃以下生涯，生涯时间不凌驾1个月，恒久生涯需置于-70℃或以下，并应阻止重复冻融。
使用磁珠BQ前，一定要混匀，磁珠BQ沉降速率较快，多个样本的加入磁珠的时间中心一定要经由几ci摇匀，推荐先加缓冲液CL及转化后产物，最后再加磁珠BQ，以免磁珠沉降。
正常征象，不影响试剂效果。
